Guia de reconstituição
A reconstituição é o processo em que um péptido liofilizado (seco por congelação) é misturado com água bacteriostática para obter uma forma líquida pronta para o trabalho de laboratório. É uma parte inseparável da preparação de péptidos de investigação e exige um ambiente estéril, uma técnica correta e um cálculo rigoroso do volume de solvente para a concentração pretendida.
5 passos da reconstituição
O procedimento resume-se em cinco passos; para o guia completo, com a explicação de cada fase, consulte o artigo detalhado.
- 1 Preparação do espaço de trabalho estéril. Limpe a superfície de trabalho com álcool isopropílico a 70 %. Material: frasco liofilizado, água bacteriostática, seringa estéril com agulha e toalhete com álcool isopropílico.
- 2 Desinfeção das tampas. Limpe as tampas de borracha de ambos os frascos (péptido + água bacteriostática) com o toalhete e deixe secar 10 segundos; o álcool ainda húmido seria empurrado para dentro pela agulha.
- 3 Aspiração da água bacteriostática. Com uma seringa estéril, retire o volume calculado de água bacteriostática. Sem bolhas de ar.
- 4 Adição ao frasco do péptido. Introduza a agulha num ângulo oblíquo de ~45° e deixe o líquido escorrer pela parede interior do frasco, não diretamente sobre o pellet do péptido. Assim evita a formação de espuma e a desnaturação.
- 5 Dissolução. Role o frasco suavemente entre os dedos (não o agite). O liofilizado dissolve-se em 30–60 segundos. Depois da dissolução, conserve-o no frigorífico a 2–8 °C.
Erros mais frequentes
- Agitar em vez de rolar. A agitação mecânica pode desnaturar a estrutura do péptido.
- Adicionar a água bacteriostática demasiado depressa. Se o líquido cair diretamente sobre o pellet, forma-se espuma e uma parte do péptido degrada-se.
- Usar água estéril (NaCl a 0,9 %) em vez de água bacteriostática. A água estéril não tem efeito conservante: nela o péptido dura apenas 24 horas, em comparação com cerca de 28 dias em água bacteriostática.
- Guardar no congelador depois da reconstituição. Os ciclos repetidos de congelação e descongelação degradam o péptido. Depois da reconstituição, o seu lugar é o frigorífico a 2–8 °C.
- Conservar um frasco liofilizado selado à temperatura ambiente. Também o liofilizado perde estabilidade: o seu lugar é o frigorífico a 2–8 °C (curto prazo) ou o congelador a −20 °C (conservação prolongada).
Conservação
| Estado | Temperatura ótima | Duração da estabilidade |
|---|---|---|
| Liofilizado (frasco selado) | −20 °C a longo prazo / 2–8 °C a curto prazo | 24–36 meses a −20 °C |
| Depois da reconstituição com água bacteriostática | 2–8 °C, ao abrigo da luz | ~28 dias (consoante o péptido) |
| Depois da reconstituição com água estéril (sem conservante) | 2–8 °C | 24 horas |
Nota: a duração real da estabilidade varia consoante o péptido. Consulte sempre a documentação técnica do lote em concreto.
Volume de água bacteriostática
Para a concentração que pretende preparar aplica-se uma relação simples:
volume de água bacteriostática (mL) = quantidade de péptido (mg) ÷ concentração pretendida (mg/mL) Exemplo: 5 mg de péptido dissolvidos em 2 mL de água bacteriostática dão uma concentração de 2,5 mg/mL.
Para um cálculo rápido e sem erros, utilize a calculadora de péptidos, uma ferramenta interativa que calcula o volume de solvente e a quantidade por dose de acordo com o seu protocolo experimental.
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Perguntas frequentes
O que é a água bacteriostática?
A água bacteriostática é água estéril com 0,9 % de álcool benzílico como conservante. Impede o crescimento microbiano no péptido reconstituído e prolonga a estabilidade até cerca de 28 dias.
Quanto tempo dura um péptido depois da reconstituição?
Em água bacteriostática a 2–8 °C, um péptido mantém-se habitualmente estável durante 28 dias. A duração exata depende do péptido e consta da documentação técnica do lote.
O que faço se vir partículas ou turvação no frasco depois da reconstituição?
Descarte-o de qualquer utilização posterior. A turvação indica agregação ou contaminação microbiana. Registe o número do lote e contacte o fornecedor.
Posso congelar um péptido reconstituído?
Não é recomendado. Os ciclos repetidos de congelação e descongelação reduzem a atividade do péptido. Se o armazenamento prolongado for necessário, divida em alíquotas de menor volume e congele apenas uma vez.
O que faço se não tiver água bacteriostática?
A água estéril (NaCl a 0,9 %) é uma alternativa, mas a estabilidade desce para cerca de 24 horas. Para protocolos experimentais mais longos, a água bacteriostática é o padrão.
