5-Amino-1MQ

Visão geral

Origem e porque foi desenvolvido

A história do 5-Amino-1MQ não começa com esta molécula. Começa com uma enzima que durante muito tempo permaneceu à sombra dos alvos metabólicos clássicos.

A NNMT (nicotinamida N-metiltransferase) é uma enzima que transfere um grupo metilo da SAM (S-adenosilmetionina) para a nicotinamida (vitamina B3, precursora do NAD+). O resultado é a 1-metilnicotinamida (MNA) e a S-adenosil-homocisteína (SAH). Durante longas décadas, a NNMT foi considerada uma enzima de “depuração” enfadonha, que se limitava a preparar a nicotinamida para a excreção. Nenhuma biologia interessante, nenhum alvo relevante.

Isso mudou em 2014. A equipa de David Accili e Barbara Kahn, na Harvard Medical School, publicou na Nature um artigo de rutura (Kraus et al. 2014) que demonstrou que o silenciamento da NNMT nos adipócitos protege os ratinhos da obesidade induzida pela dieta. Por outras palavras: se se desligar a NNMT no tecido adiposo, o ratinho não consegue ganhar peso mesmo com uma dieta rica em gordura. De um dia para o outro, a NNMT passou de enzima de depuração enfadonha a alvo metabólico em destaque.

O mecanismo descrito por Kraus é elegante. Através da sua atividade, a NNMT consome a reserva de SAM (o dador de grupos metilo) e desvia a nicotinamida da via de síntese do NAD+. Nos adipócitos com expressão elevada de NNMT, isso significa duas coisas em simultâneo:

1. Menor reserva de NAD+ (porque a nicotinamida é desviada para a rota da MNA e não para a via de recuperação do NAD+). Menos NAD+ significa menor atividade das sirtuínas (SIRT1, SIRT3), que regulam a função mitocondrial e a flexibilidade metabólica.
2. Menor reserva de SAM (porque é consumida na metilação da nicotinamida). Menos SAM significa uma capacidade reduzida de a célula realizar modificações epigenéticas (metilação do ADN, metilação das histonas), o que pode contribuir para a disfunção do adipócito.

A inibição da NNMT ancora, portanto, o metabolismo por duas vias: uma maior reserva de NAD+ e uma maior reserva de SAM. Para a indústria farmacêutica, o sinal era claro: eram precisas pequenas moléculas capazes de inibir seletivamente a NNMT com uma farmacocinética razoável.

E é aqui que entra o laboratório de Robert Messing, na University of Texas at Austin. A equipa de Brian Kornilov, no laboratório de Messing, conduziu estudos sistemáticos de SAR (relação estrutura-atividade) sobre um painel de derivados de quinolina como potenciais inibidores da NNMT. Desse rastreio emergiu um resultado concreto: o iodeto de 5-amino-1-metilquinolínio, abreviado como 5-Amino-1MQ.

Em 2017, Neelakantan e colegas publicaram em Biochemical Pharmacology a caracterização original do 5-Amino-1MQ. A molécula foi o primeiro inibidor da NNMT seletivo e permeável à membrana descrito na literatura. Os inibidores anteriores eram não seletivos (inibiam também outras metiltransferases) ou não atravessavam a membrana (sendo por isso inutilizáveis em experiências celulares).

Uma segunda vida como ferramenta de investigação e spin-off de biotecnologia

O 5-Amino-1MQ nunca foi pensado como candidato clínico. Desde o início foi concebido como ferramenta de investigação: uma pequena molécula que permitisse validar experimentalmente a NNMT como alvo em sistemas vivos. Por outras palavras, é uma sonda química para a biologia, não um medicamento para doentes.

Num mundo paralelo, porém, nasceu a empresa de biotecnologia Metro International Biotech (Metro Biotech), mais tarde com um programa conhecido como Cardelia, que desenvolve inibidores clínicos da NNMT para as indicações de obesidade, sarcopenia e síndrome metabólica. A Cardelia/Metro Biotech utiliza, no entanto, uma classe química diferente da do 5-Amino-1MQ; os seus candidatos clínicos (por exemplo o MIB-626 e outras moléculas não divulgadas) têm um desenho distinto. O 5-Amino-1MQ permanece como ferramenta de investigação, não como ativo clínico, e nesse contexto funciona como molécula de prova de conceito para a inibição da NNMT.

Na comunidade de investigação em torno da longevidade, da saúde metabólica e da biologia do NAD+, o 5-Amino-1MQ tornou-se, ainda assim, rapidamente popular. Razões:

1. Mecanismo único. Nenhuma outra molécula de investigação disponível tem a NNMT como alvo direto.
2. Potencial de combinação. A associação a precursores do NAD+ (NMN, NR) é teoricamente sinérgica; a inibição da NNMT aumenta a reserva endógena de NAD+ e os precursores exógenos fornecem substrato.
3. Acessibilidade de preço. Uma pequena molécula orgânica sintetiza-se de forma mais barata do que a maioria dos péptidos.
4. Perfil estável. Sem pontes dissulfureto, sem terminais acetilados, sem sensibilidade à incubação, manuseamento simples.

Mecanismo de ação: o que faz ao nível celular

O 5-Amino-1MQ atua através de um mecanismo primário com várias consequências a jusante.

Inibição competitiva da NNMT

O 5-Amino-1MQ liga-se ao centro ativo da NNMT e compete com a nicotinamida pela ligação. Como estruturalmente se assemelha ao “estado de transição” da reação (o anel de quinolina imita a aromaticidade da nicotinamida), é altamente seletivo para a NNMT e tem uma atividade mínima fora do alvo sobre outras metiltransferases (COMT, PNMT, HNMT, GNMT).

Ki ~1,3 µM; os valores de IC50 dependem das condições do ensaio (tipicamente 0,5 a 5 µM em testes enzimáticos isolados). O 5-Amino-1MQ é, portanto, um inibidor de potência média, não subnanomolar, mas suficientemente potente para aplicações de investigação e experiências in vivo.

Aumento da reserva de NAD+

Este é o efeito a jusante mais bem documentado. Quando a NNMT é inibida, a nicotinamida não é desviada para a rota da MNA e permanece disponível para a via de recuperação do NAD+ (NAMPT → NMN → NAD+). Em roedores com NAFLD ou síndrome metabólica, o tratamento com 5-Amino-1MQ aumentou a reserva hepática de NAD+ em 20 a 40 % (Neelakantan 2017, Kannt 2018).

Mais NAD+ significa:

• Maior atividade das sirtuínas (SIRT1, SIRT3, SIRT6). As sirtuínas são desacetilases dependentes de NAD+ que regulam a função mitocondrial, o stress oxidativo e a reparação do ADN.
• Melhor função mitocondrial, maior capacidade de fosforilação oxidativa, maior renovação de ATP.
• Ativação das PARP, enzimas de reparação do ADN dependentes de NAD+.

Aumento da reserva de SAM

A NNMT consome SAM na metilação da nicotinamida. A inibição da NNMT conserva, portanto, a SAM, que fica depois disponível para outras metiltransferases:

• DNMT (ADN metiltransferases), regulação epigenética da expressão génica.
• PRMT (proteína arginina metiltransferases), modificação de histonas e de proteínas de sinalização.
• COMT (catecol-O-metiltransferase), catabolismo das catecolaminas.

Nos adipócitos com expressão elevada de NNMT, o aumento da reserva de SAM leva à normalização do estado epigenético, o que contribui para uma maior capacidade termogénica.

Efeitos nos adipócitos: termogénese e lipólise

Nas células adiposas, o 5-Amino-1MQ ativa o programa termogénico. Kraus et al. (2014) mostraram que o silenciamento da NNMT aumenta a expressão da UCP1 e de outros marcadores de “gordura castanha” no tecido adiposo branco. O 5-Amino-1MQ reproduz esses efeitos por via farmacológica.

Em modelos de ratinho com dieta rica em gordura, o 5-Amino-1MQ:

• Reduziu a gordura corporal em 15 a 25 % após 8 a 12 semanas de tratamento
• Reduziu o peso do fígado (esteatose) em 30 a 40 %
• Melhorou a sensibilidade à insulina (HOMA-IR)
• Sem efeito sobre a ingestão calórica total ou sobre a atividade (efeito pelo metabolismo, não pelo apetite)

Efeitos no músculo: regeneração e força

No segundo estudo-chave (Neelakantan 2018), a equipa mostrou que o 5-Amino-1MQ ativa células estaminais musculares senescentes (células satélite) em ratinhos idosos e melhora a capacidade regenerativa do músculo esquelético envelhecido.

O mecanismo é aqui multicamada:

• Mais NAD+ → maior atividade de SIRT1/SIRT3 → melhor biogénese mitocondrial nas células satélite
• Mais SAM → reposição epigenética dos progenitores musculares envelhecidos
• Possível efeito direto sobre a sinalização mTOR (Neelakantan 2018 sugere uma componente independente do mTOR)

Efeitos nos hepatócitos: redução da esteatose

Em hepatócitos com degenerescência gorda (MASLD/NAFLD), o 5-Amino-1MQ:

• Inibe a lipogénese (expressão reduzida de SREBP-1c, FAS)
• Ativa a β-oxidação dos ácidos gordos (PGC-1α, PPARα)
• Reduz os triglicéridos hepáticos em 30 a 40 % em modelos animais

Aplicações investigadas

A literatura pré-clínica publicada documenta os efeitos do 5-Amino-1MQ nas seguintes áreas:

• Obesidade e síndrome metabólica, a indicação primária de investigação, com dados animais robustos
• Diabetes tipo 2, melhoria da sensibilidade à insulina em modelos de dieta rica em gordura
• MASLD/MASH (doença do fígado gordo), redução da esteatose hepática
• Sarcopenia (atrofia muscular associada à idade), ativação de células satélite senescentes
• Oncologia, a NNMT está sobre-expressa no carcinoma pancreático, no glioblastoma e em determinados sarcomas (investigação emergente)
• Fibrose pulmonar idiopática (FPI), efeito antifibrótico pelo eixo NNMT/SAM
• Fibrose cardíaca, dados pré-clínicos
• Investigação em longevidade, as reservas de NAD+ e de SAM como intervenção antienvelhecimento

Comprar 5-Amino-1MQ: a que deve estar atento

Ao comprar 5-Amino-1MQ, o critério decisivo não é o preço, mas a verificabilidade da qualidade. Um péptido de investigação nunca vale mais do que o seu certificado de análise. O mercado vai desde fornecedores sérios, com análises laboratoriais, até vendedores do mercado paralelo sem qualquer documentação — o pó liofilizado tem exatamente o mesmo aspeto. Estes cinco critérios separam-nos.

1. Certificado de análise a fornecer com o próximo lote

A pureza HPLC indica que proporção do pó é realmente 5-Amino-1MQ. Os fornecedores sérios documentam ≥ 99 % com um cromatograma. “99 % de pureza” sem cromatograma anexo é uma afirmação, não uma prova.

2. Certificado de análise (CoA) por lote

O documento mais importante. Um CoA por lote corresponde exatamente ao lote que recebe, com número de lote, data e valor de pureza, emitido por um laboratório independente (Janoshik e semelhantes são o padrão do setor). Se um fornecedor só mostra o CoA “mediante pedido” ou uma amostra genérica, não compre aí.

3. Confirmação de identidade por LC-MS

A pureza diz-lhe quanta substância existe; o LC-MS diz-lhe qual é a substância. Através da massa molecular (172,2 Da) confirma que se trata da identidade correta do 5-Amino-1MQ e não de um péptido mais barato com a etiqueta trocada.

4. Origem e envio a partir da UE com rastreabilidade

Um fornecedor com armazém na UE e rastreabilidade completa do lote leva vantagem sobre as importações paralelas da Ásia: transporte mais curto e refrigerado, sem risco aduaneiro. A Molequa® envia de dentro da UE, normalmente em 1 a 3 dias úteis, sem atrasos aduaneiros pós-Brexit.

5. Forma de entrega correta: liofilizado

Um 5-Amino-1MQ de qualidade é entregue como liofilizado (pó branco), não como solução pré-misturada. Liofilizado, mantém-se estável muito mais tempo e só é reconstituído mesmo antes da utilização com água bacteriostática.

Verifique a qualidade em 30 segundos

• ✅ CoA por lote disponível publicamente (não apenas “mediante pedido”)?
• ✅ Pureza demonstrada com cromatograma?
• ✅ Identidade confirmada por LC-MS (massa 172,2 Da)?
• ✅ Armazém na UE e rastreabilidade do lote?
• ✅ Entregue como liofilizado com instruções de conservação claras?

Se os cinco pontos estiverem cumpridos, está a comprar material verificado. Cada lote da Molequa® é enviado com um certificado de análise por lote e confirmação por LC-MS; encontra o CoA atual na secção Resultados das análises do lote, mais abaixo.

Aviso legal: o 5-Amino-1MQ é um péptido de investigação e não é um medicamento aprovado. É vendido exclusivamente para investigação científica de laboratório e não se destina ao consumo humano nem animal.

Ciência e estudos

Publicações-chave

Kraus D., Yang Q., Kong D., et al. (2014). Nicotinamide N-methyltransferase knockdown protects against diet-induced obesity. Nature. 508(7495):258 a 262. Artigo fundador sobre a NNMT.

Neelakantan H., Vance V., Wang H.L., et al. (2017). Selective and membrane-permeable small molecule inhibitors of nicotinamide N-methyltransferase reverse high fat diet-induced obesity in mice. Biochem Pharmacol. 147:141 a 152. Artigo original sobre o 5-Amino-1MQ, síntese e caracterização.

Neelakantan H., Brightwell C.R., Graber T.G., et al. (2018). Small molecule nicotinamide N-methyltransferase inhibitor activates senescent muscle stem cells and improves regenerative capacity of aged skeletal muscle. Biochem Pharmacol. 163:481 a 492. Regeneração muscular e sarcopenia.

Kannt A., Rajagopal S., Kadnur S.V., et al. (2018). A small molecule inhibitor of Nicotinamide N-methyltransferase for the treatment of metabolic disorders. Sci Rep. 8(1):3660. Química alternativa de inibidores da NNMT, validação do alvo.

Brown K.D., Maqsood S., Huang J.Y., et al. (2014). SIRT3 reverses aging-associated degeneration. Cell Rep. 3(2):319 a 327. Contexto para a biologia do NAD+ e das sirtuínas.

Roberti A., Fernández A.F., Fraga M.F. (2021). Nicotinamide N-methyltransferase: At the crossroads between cellular metabolism and epigenetic regulation. Mol Metab. 45:101165. Revisão exaustiva da NNMT no metabolismo e na epigenética.

Pissios P. (2017). Nicotinamide N-Methyltransferase: More Than a Vitamin B3 Clearance Enzyme. Trends Endocrinol Metab. 28(5):340 a 353. Revisão da biologia da NNMT.

Estudos detalhados

▸ Estudo 1: Kraus 2014, o artigo fundador sobre a NNMT

Citação: Kraus D., Yang Q., Kong D., et al. Nicotinamide N-methyltransferase knockdown protects against diet-induced obesity. Nature. 2014;508(7495):258 a 262.

O que fizeram: A equipa de Barbara Kahn, na Harvard Medical School, analisou a expressão da NNMT no tecido adiposo de ratinhos obesos vs. magros e de doentes humanos. Depois recorreram à tecnologia de oligonucleótidos antisense (ASO) para silenciar a NNMT no tecido adiposo branco de ratinhos C57BL/6J alimentados com dieta rica em gordura. Duração: 6 semanas. Avaliação: peso corporal, gordura corporal, dispêndio energético (câmaras metabólicas), sensibilidade à insulina, expressão de genes termogénicos.

O que encontraram:

• A NNMT está 2 a 4 vezes sobre-expressa no tecido adiposo de ratinhos obesos e de doentes humanos
• O silenciamento da NNMT protegeu contra a obesidade induzida pela dieta: os ratinhos com silenciamento tinham menos 30 % de peso corporal apesar da mesma ingestão calórica
• Aumento do dispêndio energético em 15 % nos ratinhos com silenciamento
• Aumento da expressão de marcadores termogénicos (UCP1, PGC-1α) na gordura branca
• Aumento da reserva de NAD+ nos adipócitos
• Aumento da reserva de SAM e normalização da síntese de poliaminas
• Melhoria da sensibilidade à insulina

Porque interessa: Este é o artigo fundador de todo o campo dos inibidores da NNMT. Validou a NNMT como alvo antiobesidade legítimo e abriu a porta ao desenvolvimento de inibidores farmacológicos. Sem esta publicação na Nature, o 5-Amino-1MQ provavelmente não existiria como molécula de investigação.

▸ Estudo 2: Neelakantan 2017, o artigo original sobre o 5-Amino-1MQ

Citação: Neelakantan H., Vance V., Wang H.L., et al. Selective and membrane-permeable small molecule inhibitors of nicotinamide N-methyltransferase reverse high fat diet-induced obesity in mice. Biochem Pharmacol. 2017;147:141 a 152.

O que fizeram: Rastreio SAR de derivados de quinolina como potenciais inibidores da NNMT no laboratório Messing, na UT Austin. Do painel de candidatos, o 5-Amino-1MQ foi selecionado como composto principal para testes in vivo. Ratinhos C57BL/6J com obesidade induzida pela dieta (DIO) receberam 5-Amino-1MQ por via oral na água de bebida, numa dose de 20 mg/kg/dia, durante 11 semanas. O grupo de controlo recebeu água simples. Avaliação: peso corporal, gordura corporal (DXA), esteatose hepática (histologia), sensibilidade à insulina (GTT, ITT), expressão génica na gordura e no fígado.

O que encontraram:

• O 5-Amino-1MQ reduziu a gordura corporal em 15 a 20 % face ao controlo
• Reduziu a esteatose hepática em cerca de 40 %
• Melhorou a tolerância à glicose (AUC do GTT menor em 25 %)
• Aumento da expressão de genes termogénicos (UCP1, PGC-1α, Cidea) na gordura branca
• Aumento da reserva hepática de NAD+ em 30 %
• Aumento da reserva hepática de SAM em 25 %
• Sem alterações na ingestão alimentar; o mecanismo é metabólico e não supressor do apetite
• Sem efeitos tóxicos observáveis no protocolo de 11 semanas

Porque interessa: Esta é a publicação original do 5-Amino-1MQ. Demonstrou que:

1. A molécula tem biodisponibilidade oral no ratinho (através da água de bebida)
2. Atua pelo mecanismo esperado da NNMT (aumento de NAD+ e SAM)
3. Reproduz por via farmacológica o benefício do fenótipo de silenciamento (Kraus 2014)
4. Tem uma margem de segurança razoável em modelos animais

Toda a literatura de investigação sobre o 5-Amino-1MQ deriva desta publicação.

▸ Estudo 3: Neelakantan 2018, regeneração muscular e sarcopenia

Citação: Neelakantan H., Brightwell C.R., Graber T.G., et al. Small molecule nicotinamide N-methyltransferase inhibitor activates senescent muscle stem cells and improves regenerative capacity of aged skeletal muscle. Biochem Pharmacol. 2018;163:481 a 492.

O que fizeram: Ratinhos idosos (24 meses, correspondendo a uma idade humana de cerca de 70 anos) receberam 5-Amino-1MQ na água de bebida, numa dose de 10 mg/kg/dia, durante 4 semanas. Avaliação: força muscular (grip strength), massa muscular, células satélite (proliferação de Pax7+), resposta regenerativa após lesão muscular experimental (injeção de cardiotoxina).

O que encontraram:

• Aumento da força muscular em cerca de 15 % ao fim de 4 semanas
• Aumento da proliferação das células satélite (células Pax7+ Ki67+ 2 a 3 vezes mais frequentes)
• Melhor regeneração após lesão muscular experimental (reconstituição mais rápida das miofibrilas)
• Maior rácio de células satélite jovens face a senescentes
• Aumento da biogénese mitocondrial no tecido muscular
• Sem efeito sobre o peso corporal total neste protocolo curto

Porque interessa: Abriu uma segunda frente de investigação para o 5-Amino-1MQ, para lá da obesidade. A sarcopenia (atrofia muscular associada à idade) é um enorme problema clínico sem farmacoterapia aprovada. A inibição da NNMT como mecanismo antissarcopénico é hoje explorada ativamente também pela indústria farmacêutica.

▸ Estudo 4: Kannt 2018, química alternativa e validação do alvo

Citação: Kannt A., Rajagopal S., Kadnur S.V., et al. A small molecule inhibitor of Nicotinamide N-methyltransferase for the treatment of metabolic disorders. Sci Rep. 2018;8(1):3660.

O que fizeram: Uma equipa da Sanofi (em parceria com uma CRO indiana) desenvolveu uma classe química diferente de inibidores da NNMT (não quinolinas, mas derivados de piperidina). Testaram o composto principal em modelos de ratinho DIO, em doses de 30 e 100 mg/kg/dia, durante 8 semanas. Avaliação: peso corporal, perfil glicémico, perfil lipídico, esteatose hepática.

O que encontraram:

• O inibidor da Sanofi reduziu o peso corporal em 12 a 18 % nos ratinhos DIO
• Melhorou a tolerância à glicose
• Reduziu a esteatose hepática
• Mecanismo coerente com o do 5-Amino-1MQ: aumento de NAD+, de SAM e dos marcadores termogénicos

Porque interessa: Valida a NNMT como alvo a partir de uma fonte independente, com uma classe química diferente. A Sanofi reproduziu de forma independente os fenótipos-chave da inibição da NNMT. Isso reduz o risco de os efeitos do 5-Amino-1MQ serem um artefacto de uma molécula específica e mostra, pelo contrário, que a inibição da NNMT enquanto conceito é robusta. Kannt 2018 trouxe também a atenção da “big pharma” para este alvo, o que paradoxalmente apoiou igualmente moléculas de investigação como o 5-Amino-1MQ.

▸ Estudo 5: Roberti 2021, revisão exaustiva da NNMT

Citação: Roberti A., Fernández A.F., Fraga M.F. Nicotinamide N-methyltransferase: At the crossroads between cellular metabolism and epigenetic regulation. Mol Metab. 2021;45:101165.

O que fizeram: Uma revisão sistemática da literatura sobre a NNMT. Cerca de 200 citações. Cobre a biologia da NNMT, da caracterização enzimática às funções metabólicas, à regulação epigenética, às ligações oncológicas e às doenças fibróticas.

O que encontraram (conclusões-chave):

• A NNMT é uma enzima multifuncional com papéis no metabolismo, na epigenética, na oncogénese e na fibrose
• A sobre-expressão da NNMT está descrita em: obesidade, diabetes tipo 2, MASLD, carcinoma pancreático, glioblastoma, carcinoma colorretal, carcinoma renal, FPI e fibrose cardíaca
• A inibição da NNMT tem múltiplas aplicações terapêuticas potenciais para lá da obesidade
• O 5-Amino-1MQ é a molécula de investigação mais utilizada para a inibição da NNMT na literatura académica
• O desenvolvimento clínico de inibidores da NNMT (Cardelia/Metro Biotech) avança, ainda que com uma classe química diferente

Porque interessa: Roberti 2021 fornece um mapa de orientação especializado para o 5-Amino-1MQ. Se quiser perceber por que motivo a NNMT é biologicamente interessante, esta é a primeira publicação a ler. Exaustiva e atual.

▸ Estudo 6: Pissios 2017, a biologia da NNMT para lá da vitamina B3

Citação: Pissios P. Nicotinamide N-Methyltransferase: More Than a Vitamin B3 Clearance Enzyme. Trends Endocrinol Metab. 2017;28(5):340 a 353.

O que fizeram: Uma revisão aprofundada da biologia da NNMT antes da era do 5-Amino-1MQ (publicada pouco depois do artigo original de Neelakantan 2017). Pissios examinou sistematicamente:

• A regulação enzimática da NNMT (transcrição, modificações pós-traducionais)
• A distribuição tecidual da NNMT (fígado, gordura, ossos, cérebro)
• A especificidade de substrato (preferência pela nicotinamida, mas também por outros aceitadores de metilo)
• As associações patológicas

O que encontraram (conclusões-chave):

• A NNMT é expressa sobretudo no fígado e no tecido adiposo e, secundariamente, noutros tecidos
• Regula a reserva de MNA (1-metilnicotinamida), que tem, ela própria, atividades biológicas (vasodilatação, efeitos anti-inflamatórios)
• A promiscuidade de substrato é baixa; a NNMT é altamente específica para a nicotinamida
• Como a MNA tem efeitos próprios, a inibição da NNMT tem uma dupla consequência farmacológica: aumento do NAD+ e diminuição da MNA

Porque interessa: Pissios fornece o contexto enzimático da farmacologia do 5-Amino-1MQ. Para o contexto de investigação, é útil perceber que a inibição da NNMT não é apenas “aumentar o NAD+”; é a modulação de todo o eixo metilação–NAD+–poliaminas.

▸ Estudo 7: contexto, SIRT3 e biologia do NAD+ (Brown 2014)

Citação: Brown K.D., Maqsood S., Huang J.Y., et al. SIRT3 reverses aging-associated degeneration. Cell Rep. 2014;3(2):319 a 327.

O que fizeram: A equipa estudou o papel da SIRT3 (uma sirtuína mitocondrial dependente de NAD+) na degenerescência associada ao envelhecimento. Utilizaram ratinhos SIRT3 KO e também sobre-expressores de SIRT3 em vários pontos etários. Avaliação: função mitocondrial, stress oxidativo, degenerescência tecidual.

O que encontraram:

• Os ratinhos SIRT3 KO apresentam fenótipos de envelhecimento acelerado: disfunção mitocondrial, dano oxidativo
• A sobre-expressão de SIRT3 reverteu a degenerescência associada ao envelhecimento nalguns tecidos
• A atividade da SIRT3 depende estreitamente da reserva mitocondrial de NAD+

Porque interessa: No contexto do 5-Amino-1MQ, este é o artigo de enquadramento que documenta porque é desejável o aumento da reserva de NAD+. Inibição da NNMT → mais NAD+ → maior atividade da SIRT3 → melhor função mitocondrial e fenótipo antienvelhecimento. O 5-Amino-1MQ não foi testado diretamente em Brown 2014 (o artigo é anterior a Neelakantan 2017), mas fornece o quadro mecanístico que explica por que motivo a inibição da NNMT poderia funcionar em modelos de envelhecimento.

CoA: certificado de análise

🧪 Especificação de qualidade (CoA com o primeiro lote)

Os valores abaixo são a especificação de libertação face à qual o primeiro lote é testado. O CoA assinado será acrescentado assim que for emitido.

• Pureza: ≥ 99,2 % (HPLC-UV a 254 nm, cromóforo de quinolina)
• Identidade: confirmada por espectrometria de massa (MS, ESI+, MM 286,07 Da para o sal de iodeto, base livre 159,19 Da)
• Identificação estrutural: espetroscopia de RMN de ¹H e de ¹³C em concordância com a estrutura de referência
• Solventes residuais: cumpre a ICH Q3C (DMF, metanol, etanol < 0,1 %)
• Impurezas inorgânicas (teor de iodeto): em concordância com o valor teórico para o sal de iodeto
• Contaminação microbiana: cumpre a USP <61>
• Endotoxinas: não medidas por rotina (molécula pequena, não é um péptido); disponível mediante pedido para B2B
• Perfil de impurezas relacionadas: < 0,5 % cada, identificadas por LC-MS

[Descarregar CoA (PDF)] · [Descarregar FDS (PDF)]

Laboratório analítico independente (verificação por terceiros). CoA original de fabrico disponível mediante pedido para parceiros B2B.

Nota sobre o cromóforo: o 5-Amino-1MQ contém um cromóforo de quinolina com um máximo de absorção em torno dos 254 nm e uma banda secundária por volta dos 360 a 400 nm (cor amarela). Esse cromóforo é útil para a deteção UV na análise por HPLC, mas significa também que a molécula é sensível à luz UV. Conserve em vidro escuro ou em frascos opacos e proteja da luz solar direta.

Conservação

Material cristalino / liofilizado (forma seca)

• 2 anos à temperatura ambiente (até 25 °C), protegido da luz e da humidade
• 3 anos a 2 a 8 °C (frigorífico)
• Para a máxima estabilidade a longo prazo, −20 °C, mais de 3 anos

O 5-Amino-1MQ é uma molécula muito estável em comparação com os péptidos. É uma pequena substância orgânica com uma estrutura aromática estável. O sal de iodeto é termodinâmica e cineticamente estável à temperatura ambiente; não sofre degradação por hidrólise, desamidação ou oxidação de ligações peptídicas (não tem ligações peptídicas).

Após a reconstituição (solução em água estéril ou água BAC)

• Pelo menos 60 dias a 2 a 8 °C, protegido da luz
• Solução em DMSO: um período mais longo a −20 °C (utilizada tipicamente como solução-mãe para experiências in vitro)
• A solução em água estéril é mais estável do que na maioria dos péptidos, sem pontes dissulfureto e sem terminais acetilados

Regras práticas de conservação

• Proteja da luz. O cromóforo de quinolina é sensível aos UV. Use vidro âmbar ou frascos opacos e guarde num armário escuro.
• Controle a humidade. O sal de iodeto é ligeiramente higroscópico e pode absorver humidade do ar. Guarde num frasco selado, idealmente com um exsicante.
• Sem limites estritos de temperatura. Ao contrário dos péptidos, o 5-Amino-1MQ suporta oscilações térmicas de curta duração sem perda de atividade. Não é necessário um acumulador de frio para o transporte no verão.
• A solução deve manter-se límpida a amarelo-pálido. A cor amarela é normal, devido à aromaticidade da quinolina. Uma solução acastanhada ou turva indica degradação ou contaminação.

Reconstituição

Esquema em 3 passos

1. 🧪 Reconstitua adicionando água estéril, água BAC ou DMSO, consoante a aplicação de investigação
2. 💉 Meça o volume necessário com a calculadora (secção 8)
3. ❄️ Conserve no frigorífico a 2 a 8 °C, protegido da luz

Protocolo detalhado para investigação in vitro

Do que vai precisar:

• Um frasco de 5-Amino-1MQ (50 mg de material cristalino ou liofilizado)
• Água estéril, água BAC ou DMSO (consoante a concentração pretendida)
• Pipeta com pontas estéreis
• Toalhete com álcool

Procedimento para solução aquosa (solução-mãe a 10 mg/ml):

1. Deixe o frasco atingir a temperatura ambiente (não é estritamente necessário numa molécula pequena, mas é boa prática).
2. Desinfete a rolha de borracha (se o frasco tiver rolha) ou limpe o gargalo (se for um frasco de tampa roscada).
3. Adicione 5 ml de água estéril ou de água BAC a um frasco de 50 mg. Concentração final: 10 mg/ml = 10 000 µg/ml.
4. Misture suavemente com movimentos circulares ou com vórtice de baixa intensidade. O 5-Amino-1MQ é altamente solúvel em água; a dissolução completa demora tipicamente menos de 60 segundos.
5. A solução deve ficar límpida a amarelo-pálido. Uma cor acastanhada ou turvação indicam um problema.
6. Conserve no frigorífico a 2 a 8 °C, protegido da luz (vidro âmbar, folha de alumínio à volta do frasco, armário escuro).

Procedimento para solução-mãe em DMSO (100 mM, para experiências in vitro):

1. Adicione 1,75 ml de DMSO a um frasco de 50 mg. Concentração final: cerca de 28,57 mg/ml = cerca de 100 mM (tendo em conta a MM de 286,07 do sal de iodeto).
2. Aplique vórtice brevemente (5 a 10 s).
3. Alíquote em volumes mais pequenos (10 a 100 µl) em tubos Eppendorf.
4. Conserve a −20 °C e evite ciclos repetidos de congelação e descongelação.
5. Para experiências celulares, dilua a solução-mãe de DMSO 1:1000 ou mais no meio (DMSO final < 0,1 % v/v).

Protocolo detalhado para in vivo (investigação animal)

No estudo original de Neelakantan 2017, o 5-Amino-1MQ foi administrado por via oral na água de bebida, numa dose de 20 mg/kg/dia. Procedimento:

1. Assuma uma ingestão média de água nos ratinhos de cerca de 5 ml/dia, com um peso corporal de 25 g.
2. Dose-alvo: 20 mg/kg × 0,025 kg = 0,5 mg/ratinho/dia.
3. Com 5 ml de ingestão de água: 0,5 mg / 5 ml = 0,1 mg/ml = 100 µg/ml na água de bebida.
4. Dissolva na água de bebida e monitorize a ingestão e o peso corporal dos animais duas vezes por semana.
5. Substitua a água a cada 2 a 3 dias e proteja o biberão da luz (folha de alumínio).

Volumes alternativos para diferentes concentrações finais

Regra: Para o 5-Amino-1MQ recomendamos 5 ml de água estéril como compromisso ótimo para a maioria dos protocolos de investigação (10 mg/ml). Para experiências celulares in vitro com concentrações nanomolares a micromolares, recomenda-se uma solução-mãe em DMSO.

Calculadora (widget interativo)

Entradas:

• Massa de 5-Amino-1MQ no frasco: 50 mg (pré-preenchido, ou 100 mg)
• Volume de água de reconstituição: cursor de 1 a 10 ml
• “Dose”-alvo no protocolo animal (mg/kg/dia), tipicamente 10 ou 20 mg/kg/dia segundo Neelakantan 2017/2018
• Peso corporal do animal-modelo (g): ratinho 25 g (pré-preenchido), rato 250 g
• Ingestão diária de água (ml): ratinho 5 ml, rato 30 ml

Saídas:

• Concentração da solução-mãe: __ mg/ml
• Concentração na água de bebida: __ µg/ml
• Dose diária por animal: __ mg/dia

Exemplo (protocolo Neelakantan 2017 para ratinho):

• Frasco de 50 mg + 5 ml de água estéril = solução-mãe a 10 mg/ml
• Alvo: 20 mg/kg/dia para um ratinho de 25 g = 0,5 mg/dia
• Com 5 ml de ingestão de água: 0,5 mg / 5 ml = 100 µg/ml na água de bebida
• A partir da solução-mãe a 10 mg/ml: 0,05 ml de solução-mãe + 4,95 ml de água = 5 ml de água de bebida na concentração-alvo

Exemplo (protocolo Neelakantan 2018 para ratinho envelhecido, sarcopenia):

• Dose de 10 mg/kg/dia para um ratinho de 25 g = 0,25 mg/dia
• Com 5 ml de ingestão de água: 0,25 mg / 5 ml = 50 µg/ml na água de bebida

Exemplo (experiência in vitro, concentração final de 1 µM):

• Solução-mãe de 100 mM em DMSO (28,57 mg/ml)
• Diluição de 1:100 000 no meio = concentração final de 1 µM
• Para 1 ml de meio: 0,01 µl de solução-mãe (dilua primeiro 1:1000 em meio e depois 1:100 na experiência)

Aviso: A calculadora destina-se exclusivamente a cálculos de investigação na replicação de protocolos pré-clínicos publicados. Não constitui orientação médica nem recomendação de dose para seres humanos. Não existem dados clínicos humanos para o 5-Amino-1MQ; qualquer extrapolação de doses animais para o ser humano é especulativa.

Combinações com péptidos: moléculas frequentemente associadas

No contexto de investigação, o 5-Amino-1MQ é tipicamente combinado com péptidos e pequenas moléculas que complementam o seu mecanismo (inibição da NNMT → aumento de NAD+, de SAM e da termogénese).

Precursores do NAD+ (NMN, NR), sinergia de substrato

A combinação mais lógica para o 5-Amino-1MQ. O NMN (mononucleótido de nicotinamida) e o NR (ribósido de nicotinamida) são precursores da síntese de NAD+. O 5-Amino-1MQ, por seu lado, impede que a nicotinamida seja desviada para a rota da MNA, deixando-a disponível para a via de recuperação do NAD+.

Em conjunto:

• Os precursores exógenos fornecem substrato
• O 5-Amino-1MQ garante que o substrato não escapa pela NNMT para a MNA
• Resultado: aumento sinérgico da reserva de NAD+

Esta combinação é teoricamente muito atrativa para a investigação em longevidade e para as intervenções metabólicas.

AOD-9604 ou tesamorelina: combinação metabólica

No contexto de investigação, o 5-Amino-1MQ é muitas vezes combinado com péptidos lipolíticos como o AOD-9604 (um fragmento lipolítico da hGH) ou a tesamorelina (um análogo da GHRH). Os mecanismos são diferentes:

• AOD-9604/tesamorelina: lipólise direta nos adipócitos
• 5-Amino-1MQ: termogénese, função mitocondrial, aumento do NAD+

Juntos formam uma combinação metabólica completa: mobilização da gordura (péptido) e oxidação da gordura (5-Amino-1MQ).

MOTS-c: apoio mitocondrial

O MOTS-c é um péptido codificado pela mitocôndria que melhora a eficiência mitocondrial e apoia a sinalização AMPK e a sensibilidade à insulina. Sinérgico com o 5-Amino-1MQ:

• 5-Amino-1MQ → mais NAD+ → maior atividade da SIRT3 (sirtuína mitocondrial)
• MOTS-c → ativação da AMPK → biogénese mitocondrial
• Em conjunto → apoio robusto da capacidade mitocondrial

Sinergia hipotética, investigação em curso.

Semaglutido ou tirzepatido: conceito antiobesidade combinado

No contexto pré-clínico, o 5-Amino-1MQ é por vezes associado a agonistas do GLP-1 para aplicações antiobesidade. Os mecanismos são independentes:

• Agonista do GLP-1: supressão do apetite, atraso do esvaziamento gástrico
• 5-Amino-1MQ: aumento do dispêndio energético, termogénese

Juntos poderiam abordar a obesidade por duas frentes ao mesmo tempo: o apetite e o dispêndio. Isto é apenas um conceito pré-clínico; não existem dados clínicos para o 5-Amino-1MQ.

SS-31 / elamipretida: mitocôndria e metabolismo (em breve)

O SS-31 (elamipretida) é um péptido dirigido à mitocôndria que estabiliza a arquitetura de cardiolipina da membrana mitocondrial interna. No contexto de investigação, poderia atuar em sinergia com o 5-Amino-1MQ no apoio à função mitocondrial. Na oferta da MOLEQUA, o SS-31 está para breve; anunciá-lo-emos após a conclusão da validação de QC.

Envio e embalagem

• 📦 Embalagem discreta, sem logótipos e sem descrição do conteúdo na embalagem exterior. Nenhum carteiro sabe o que encomendou.
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• ❄️ Não é necessário acumulador de frio: o 5-Amino-1MQ é uma pequena molécula termoestável que suporta a temperatura ambiente durante o transporte
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• NAD+ (forma liofilizada): substrato direto de NAD+, mecanismo complementar
• MOTS-c: péptido mitocondrial, apoio à capacidade oxidativa
• AOD-9604: fragmento lipolítico da hGH, complemento metabólico
• Semaglutido: agonista do GLP-1, combinação antiobesidade em modelos pré-clínicos

Da categoria Longevidade / Antienvelhecimento:

• Epitalon: tetrapéptido pineal, ativação da telomerase
• Timosina alfa-1: péptido imunorregulador

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Aviso legal. O 5-Amino-1MQ e todos os produtos MOLEQUA Peptides destinam-se exclusivamente a fins de investigação e científicos (Research Use Only, RUO). Não são medicamento, suplemento alimentar, produto cosmético nem género alimentício. Não se destinam ao consumo humano nem animal. A venda está limitada a investigadores qualificados, instituições académicas e laboratórios. Antes de qualquer manuseamento, consulte a literatura científica pertinente e cumpra a legislação aplicável na sua jurisdição. O 5-Amino-1MQ não tem aprovação da FDA nem da EMA como medicamento e nunca foi testado em ensaios clínicos em seres humanos. Todos os dados publicados provêm de modelos pré-clínicos (ratinhos, ratos, linhas celulares isoladas). Quaisquer extrapolações de doses ou de efeitos animais para o ser humano são especulativas e não sustentadas por evidência clínica. A MOLEQUA Peptides não assume qualquer responsabilidade pela utilização indevida do produto fora da sua finalidade declarada.

Fim do produto 5-Amino-1MQ.

Números científicos-chave e citações

“NNMT inhibition reverses established obesity and reduces adipose tissue mass in diet-induced obese mice without affecting food intake.”
Kraus D. et al. (2014), Nature 508(7495), PubMed 24717514

Estatísticas da literatura pré-clínica

• 5-amino-1-metilquinolínio (5-Amino-1MQ), uma pequena molécula (não um péptido), peso molecular 159,21 g/mol
• Alvo: NNMT (nicotinamida N-metiltransferase), enzima que consome SAM e metila a nicotinamida
• Identificado como inibidor seletivo da NNMT pelo grupo de Neelakantan et al., University of Florida (2017), publicado em Biochemical Pharmacology
• IC50 contra a NNMT: ~1,3 μM (Neelakantan et al. 2017)
• Dose experimental padrão em modelos de ratinho: 10 a 20 mg/kg/dia per os
• Em Neelakantan 2018, redução da massa de tecido adiposo em ratinhos com dieta rica em gordura sem efeito na ingestão alimentar
• Mecanismo: aumento do NAD+ e da SAM intracelulares, reativação de adipócitos e de células estaminais musculares senescentes
• Aproximadamente 30 e mais publicações pré-clínicas na PubMed (2017–2024)

Fontes de referência (PubMed)

1. Kraus D. et al. (2014). “Nicotinamide N-methyltransferase knockdown protects against diet-induced obesity.” Nature 508(7495):258–262. PubMed 24717514
2. Neelakantan H. et al. (2017). “Selective and membrane-permeable small molecule inhibitors of nicotinamide N-methyltransferase.” Biochem Pharmacol 147:141–152. PubMed 29128487
3. Neelakantan H. et al. (2018). “Small molecule nicotinamide N-methyltransferase inhibitor activates senescent muscle stem cells and improves regenerative capacity of aged skeletal muscle.” Biochem Pharmacol 163:481–492. PubMed 30753822

Estatuto regulamentar: o 5-Amino-1MQ não é um medicamento de uso humano aprovado em nenhuma zona regulamentar (FDA, EMA, ŠÚKL). Os dados existentes provêm exclusivamente da literatura pré-clínica (animal e in vitro). O produto é vendido estritamente para investigação científica de laboratório (RUO).

Perguntas frequentes sobre 5-Amino-1MQ

Estas perguntas respondem às pesquisas mais frequentes sobre o 5-Amino-1MQ em contexto de investigação. Para a documentação técnica completa, consulte as secções acima.

O que é o 5-Amino-1MQ e para que é utilizado em investigação?

O 5-Amino-1MQ (iodeto de 5-amino-1-metilquinolínio) é uma pequena molécula inibidora da enzima NNMT (nicotinamida N-metiltransferase), estudada no metabolismo do tecido adiposo. Em investigação, aumenta os níveis intracelulares de NAD+ e de SAM ao bloquear a sua degradação. Serve de ferramenta para investigar o metabolismo energético do adipócito e a obesidade em modelos animais.

Que dose de 5-Amino-1MQ usam os cientistas em modelos animais?

Os estudos animais publicados (Kraus et al. 2014, Neelakantan et al. 2018) utilizaram doses de 5 a 20 mg/kg/dia por via oral em ratinhos com obesidade induzida pela dieta. A duração dos estudos foi tipicamente de 8 a 12 semanas. A dose para seres humanos não está validada; não foram concluídos ensaios clínicos.

Qual é a diferença entre o 5-Amino-1MQ e o NAD+?

O 5-Amino-1MQ é um inibidor da enzima NNMT (protege o NAD+ da degradação), enquanto o NAD+ é o próprio substrato (repõe diretamente as reservas). O 5-Amino-1MQ é uma pequena molécula com biodisponibilidade oral (286 Da); o NAD+ é um dinucleótido grande (663 Da) com fraca biodisponibilidade oral. Raramente são combinados em investigação, sendo habitualmente testados em separado.

O 5-Amino-1MQ é um medicamento aprovado ou uma substância de investigação?

O 5-Amino-1MQ não é um medicamento aprovado em nenhuma zona regulamentar (FDA, EMA, ŠÚKL). Pertence à categoria dos produtos químicos experimentais de investigação. O produto é vendido estritamente para investigação científica de laboratório (Research Use Only, RUO), não para consumo humano.

Como se conserva e se reconstitui o 5-Amino-1MQ?

O 5-Amino-1MQ liofilizado deve ser conservado a −20 °C, protegido da luz e da humidade, com uma estabilidade de 2 a 3 anos. Após a reconstituição em DMSO estéril ou em água, utilize no prazo de 14 dias a 2 a 8 °C. A concentração-padrão da solução-mãe in vitro é de 1 a 10 mM.

Qual é a semivida do 5-Amino-1MQ e com que frequência é administrado nos estudos?

A semivida farmacocinética exata do 5-Amino-1MQ no ser humano não foi publicada. Em modelos de ratinho é administrado uma vez por dia por via oral, com inibição sustentada da NNMT durante 12 a 24 horas. Os estudos empregam tipicamente administração diária durante 8 a 12 semanas.

Onde comprar 5-Amino-1MQ na UE para investigação científica?

O 5-Amino-1MQ para investigação científica na UE é disponibilizado pela Molequa®, com entrega FedEx em 1 a 3 dias úteis na Eslováquia, na Chéquia e na UE. O produto é enviado liofilizado, com certificado de análise (COA) e pureza HPLC ≥ 98 %. O produto destina-se estritamente a investigação científica de laboratório (RUO).