Thymosin Alpha-1

Pārskats

Izcelsme un motivācija

Timozīna α1 vēsture sākas Ņujorkā 20. gadsimta 60. un 70. gadu mijā, A. Goldšteina laboratorijā Albert Einstein College of Medicine. Goldšteins bija jauns imunologs, kas nodarbojās ar vienu no sava laika imunoloģijas fundamentālākajiem jautājumiem: kā prekursoru šūnas aizkrūts dziedzerī nobriest par funkcionāliem T limfocītiem?

20. gadsimta 60. gados zinātnieki zināja, ka aizkrūts dziedzeris (neliels orgāns aiz krūšu kaula; bērniem tas ir liels, pieaugušajiem sarūk) kaut kādā veidā ir izšķirošs imūnfunkcijai. Bērniem, kas piedzimuši bez aizkrūts dziedzera (DiDžordža sindroms), bija izteikti T šūnu imunitātes deficīti. Bet kāpēc aizkrūts dziedzeris ir tik svarīgs? Kādus signālus tas sūta?

Goldšteins izvirzīja hipotēzi, ka aizkrūts dziedzeris ražo hormonus, peptīdu signālmolekulas, kas instruē T limfocītus, kā diferencēties un funkcionēt. Viņš sāka gatavot teļu aizkrūts dziedzera ekstraktus, meklējot aktīvās sastāvdaļas. Pirmie darbi par timozīnu izolēšanu datējami ar 1966. gadu, bet 70. gadu sākumā viņš aprakstīja „Thymosin Fraction 5”, daļēji attīrītu aizkrūts dziedzera peptīdu maisījumu, kas dzīvnieku modeļos ietekmēja T limfocītu funkciju.

Pēc tam Goldšteins sistemātiski frakcionēja Thymosin Fraction 5 un izolēja atsevišķos peptīdus. Aktīvākais bija 28 aminoskābju peptīds ar N-gala acetilēšanu, ko viņš nosauca par timozīnu α1 (alfa, jo identificēts alfa frakcijā). 1977. gadā viņš publicēja tā pilno aminoskābju secību.

Sintēze un komercializācija

Tā kā Tα1 ir salīdzinoši īss peptīds (28 aa), 80. gados to kļuva iespējams iegūt ķīmiskā sintēzē (SPPS). Sintētiskais Tα1 ir ķīmiski identisks dabiskajam cilvēka Tα1: nav pēctranslācijas modifikāciju, izņemot N-gala acetilēšanu, ko veic sintēzes laikā.

90. gados sākās sintētiskā Tα1 klīniskā izstrāde (uzņēmums SciClone Pharmaceuticals), starptautiskais nepatentētais nosaukums (INN): timalfazīns.

PubMed ir vairāk nekā 800 ierakstu par timozīnu α1.

Darbības mehānisms: „imūnregulators”

Preklīniskajā literatūrā timozīnu α1 apraksta kā imūnregulatoru: ne galvenokārt imūnstimulatoru, ne imūnsupresoru, bet molekulu, kas modeļos modulē imūno atbildi.

Dendritiskās šūnas un Toll-like receptori

Pētījumos ar pelēm Tα1 aktivizēja dendritiskās šūnas pa MyD88 atkarīgo ceļu, iesaistot vairākus Toll-like receptorus (Romani u. c.). Peļu citomegalovīrusa modelī aprakstīta plazmacitoīdo dendritisko šūnu aktivācija pa TLR9/MyD88/IRF7 ceļu (Bozza u. c., 2007). TLR9 ir iedzimtās imunitātes atpazīšanas receptors, kas parasti atpazīst baktēriju CpG DNS. Šajos modeļos aprakstīta:

• dendritisko šūnu (DC), imūnsistēmas galveno antigēnu prezentējošo šūnu, aktivācija
• IL-12 ražošana; šis citokīns veicina Th1 tipa atbildi
• imūnatbildes pārvirze uz Th1 profilu (eksperimentālos modeļos)
• indolamīna 2,3-dioksigenāzes (IDO) aktivācija dendritiskajās šūnās, ko literatūra saista ar imūno toleranci (Romani 2006)

T limfocītu aktivācija un nobriešana

Literatūrā Tα1 aprakstīts kā faktors, kas veicina T limfocītu nobriešanu. Klīniskie pētījumi kā mērķa kritērijus mērīja, piemēram, CD4+ palīgu T limfocītu skaitu, CD4/CD8 attiecību un T limfocītu reaktivitāti pret mitogēniem un antigēniem. Pacientu iznākumus šeit neatkārtojam.

Citokīnu modulācija

Preklīniskajos modeļos aprakstīta citokīnu profila pārvirze uz Th1 tipu:

• Palielināšanās: IL-2, IFN-γ, IL-12 (Th1 citokīni)
• Samazināšanās atsevišķos iekaisuma modeļos: IL-6, TNF-α
• Regulācija: IL-10 (pretiekaisuma, regulējošs)

NK šūnu aktivācija

Dabiskās galētājšūnas (NK) pieder pie iedzimtās imunitātes. Literatūrā aprakstīts, ka Tα1 in vitro palielina NK šūnu citotoksisko aktivitāti.

Antiapoptotisks efekts uz T limfocītiem

Preklīniskajos modeļos aprakstīts, ka Tα1 ietekmē T limfocītu apoptozi; šeit minētais nav pārbaudīts ar šo pētniecības materiālu.

COVID-19, nesen sācies pētniecības virziens

Liu u. c. (2020) veica retrospektīvu pētījumu ar 76 pacientiem ar smagu COVID-19 (bez randomizācijas). Pacientu iznākumi šajā pētījumā nav dati par šo pētniecības materiālu.

Pētītās jomas

Publicētajā preklīniskajā un klīniskajā literatūrā Tα1 pēta šādu jomu kontekstā:

• Hronisks B hepatīts (Andreone 1996)
• Hronisks C hepatīts
• Onkoloģija, klīniskie pētījumi (apskats Garaci 2000)
• HIV infekcija, nelieli pilotpētījumi un 1./2. fāzes pētījums (1986, 2003)
• Sepse, nesen sācies pētniecības virziens
• COVID-19, retrospektīvi un novērojumu pētījumi (Liu 2020 un citi)
• Vakcīnu adjuvants imūnkompromitētās populācijās
• Ar vecumu saistīta imūnsenescence, pētniecības joma

Thymosin Alpha-1 iegāde: kam pievērst uzmanību

Ja iegādājies Thymosin Alpha-1, izšķirošais kritērijs nav cena, bet kvalitātes pārbaudāmība. Pētnieciskai vielai izšķiroša ir pārbaudāma partijas kvalitāte. Tirgū ir gan nopietni, laboratorijā pārbaudīti piegādātāji, gan pelēkā tirgus pārdevēji bez jebkādas dokumentācijas, un liofilizētais pulveris izskatās pilnīgi vienādi. Šie pieci kritēriji ļauj atšķirt vienus no otriem.

1. HPLC tīrība ≥ 99 %, dokumentēta, nevis tikai norādīta

HPLC tīrība norāda, kādu hromatogrammas laukuma daļu aizņem galvenā virsotne; piemaisījumi redzami kā atsevišķas virsotnes. Nopietni piegādātāji dokumentē ≥ 99 % ar hromatogrammu. „Tīrība 99 %” bez pievienotas hromatogrammas ir apgalvojums, nevis pierādījums.

2. Konkrētai partijai atbilstošs analīzes sertifikāts (CoA)

Tas ir svarīgākais dokuments. Partijai specifisks CoA attiecas tieši uz partiju, ko saņem, ar partijas numuru, datumu un tīrības vērtību, un to izsniedz neatkarīga laboratorija. Praktisks noteikums: pērc tur, kur partijas CoA ir publicēts vai tiks publicēts ar pirmo partiju, nevis tiek izsniegts tikai „pēc pieprasījuma”.

3. Sterilitāte un endotoksīni

Pilnīgs partijas sertifikāts dokumentē arī sterilitāti un baktēriju endotoksīnus.

4. Piegāde no ES noliktavas ar izsekojamību

Piegādātājam ar ES noliktavu un pilnu partijas izsekojamību ir priekšrocība salīdzinājumā ar pelēkā tirgus importu no Āzijas: īsāks transports, bez muitas riska. Molequa® piegādā no ES iekšienes: uz Latviju mēs piegādājam ar Packeta (Venipak, Omniva) uz izsniegšanas punktu vai ar Venipak kurjeru tieši līdz durvīm, parasti 3–5 darba dienās, bez muitas nodokļiem un muitošanas formalitātēm.

5. Pareiza piegādes forma: liofilizāts

Kvalitatīvs Thymosin Alpha-1 tiek piegādāts kā liofilizāts (balts pulveris), nevis kā iepriekš sagatavots šķīdums. Liofilizēts tas paliek stabils daudz ilgāk, un to rekonstituē ar bakteriostatisko ūdeni tikai tieši pirms eksperimentālās izmantošanas.

Pārbaudi kvalitāti 30 sekundēs

• ✅ Partijai specifisks CoA, publiski pieejams (ne tikai „pēc pieprasījuma”)?
• ✅ HPLC tīrība ≥ 99 %, pierādīta ar hromatogrammu?
• ✅ Sertifikāts dokumentē sterilitāti un endotoksīnus?
• ✅ ES noliktava un partijas izsekojamība?
• ✅ Piegādāts kā liofilizāts ar skaidriem uzglabāšanas norādījumiem?

Šie pieci punkti ir vispārēji kritēriji jebkura piegādātāja vērtēšanai. Molequa® timozīnam α1 ir pieejams vecāks analīzes sertifikāts, ko nav izsniegusi Analyton Labs; tas dokumentē tīrību ≥ 99 %: to atradīsi zemāk, sadaļā Testu rezultāti.

Juridisks brīdinājums: Molequa® piedāvājumā Thymosin Alpha-1 ir pētnieciskais peptīds, nevis reģistrētas zāles vai to ekvivalents. To pārdod tikai pētnieciskiem nolūkiem (RUO) laboratorijā, un tas nav paredzēts lietošanai cilvēkiem vai dzīvniekiem.

Zinātne un pētījumi

4.1 Galvenās publikācijas

Andreone P., Cursaro C., Gramenzi A., et al. (1996). A randomized controlled trial of thymosin-α1 versus interferon alfa treatment in patients with hepatitis B e antigen antibody and hepatitis B virus DNA positive chronic hepatitis B. Hepatology. 24(4):774–777. Tiešs salīdzinājums ar interferonu.

Romani L., Bistoni F., Gaziano R., et al. (2007). Thymosin α1 activates dendritic cells for antifungal Th1 resistance through toll-like receptor signaling. Blood. 108(7):2265–2274. Toll-like receptoru signalizācija.

Garaci E., Pica F., Rasi G., Favalli C. (2000). Thymosin alpha 1 in the treatment of cancer: from basic research to clinical application. Int J Immunopharmacol. 22(12):1067–1076. Apskats par onkoloģiju.

Liu Y., Pan Y., Hu Z., et al. (2020). Thymosin alpha 1 reduces the mortality of severe COVID-19 by restoration of lymphocytopenia and reversion of exhausted T cells. Clin Infect Dis. 71(16):2150–2157. Klīniskie dati par COVID-19.

4.2 Pētījumi sīkāk

▸ 1. pētījums: Andreone 1996, tiešs salīdzinājums ar interferonu

Atsauce: Andreone P., Cursaro C., Gramenzi A., et al. Thymosin-α1 versus interferon alfa treatment in chronic hepatitis B. Hepatology. 1996;24(4):774–777.

Ko darīja: randomizēja n = 33 pacientus ar hronisku anti-HBe pozitīvu un HBV DNS pozitīvu B hepatītu: 17 Tα1 grupā, 16 interferona α grupā. Terapija 6 mēnešus, pēc tam 6 mēnešu novērošana. Mērķa kritērijs: pilnīga atbilde (ALT normalizēšanās un HBV DNS izzušana); vērtēja arī drošumu.

Ko atklāja: Pacientu iznākumus šeit neatkārtojam: tie ir klīniska pētījuma dati par pacientiem, nevis dati par šo pētniecības materiālu.

Kāpēc tas ir svarīgi: tas ir neliels randomizēts pētījums (n = 33), kurā Tα1 tieši salīdzināja ar interferonu α, toreizējo B hepatīta standarta terapiju.

▸ 2. pētījums: Romani, dendritiskās šūnas un Toll-like receptori

Atsauce: Romani L., Bistoni F., Gaziano R., et al. Thymosin α1 activates dendritic cells for antifungal Th1 resistance through toll-like receptor signaling. Blood. 2007;108(7):2265–2274.

Ko darīja: pētīja Tα1 ietekmi uz dendritiskajām šūnām (DC), kas apstrādātas ar sēnīti Aspergillus fumigatus, un pretsēnīšu imunitāti pelēm, tostarp aspergilozes modelī pelēm pēc hematopoētisko šūnu transplantācijas.

Ko atklāja:

• Tα1 inducēja DC funkcionālu nobriešanu un IL-12 ražošanu caur p38 MAPK/NF-κB ceļu
• signāls gāja pa MyD88 atkarīgo ceļu, iesaistot vairākus Toll-like receptorus
• in vivo sintētiskais peptīds aktivizēja no Th1 atkarīgu pretsēnīšu imunitāti, paātrināja mieloīdo šūnu atjaunošanos un aizsargāja jutīgas peles pēc hematopoētisko šūnu transplantācijas no aspergilozes
• tās pašas grupas turpmākajos darbos aprakstīta TLR9 loma, piemēram, indolamīna 2,3-dioksigenāzes aktivācijā DC (Romani 2006) un plazmacitoīdo DC aktivācijā (Bozza 2007)

Kāpēc tas ir svarīgi: darbs pievērsa uzmanību Tα1 iedarbībai uz dendritiskajām šūnām un Toll-like receptoru signalizācijai. Tas palīdz saprast, kāpēc Tα1 apraksta kā „imūnregulatoru”.

▸ 3. pētījums: Garaci 2000, apskats par onkoloģiju

Atsauce: Garaci E., Pica F., Rasi G., Favalli C. Thymosin alpha 1 in the treatment of cancer: from basic research to clinical application. Int J Immunopharmacol. 2000;22(12):1067–1076.

Ko darīja: publicēja apskatu par Tα1 onkoloģijā, no pamatpētījumiem līdz klīniskajiem pētījumiem.

Kāpēc tas ir svarīgi: apskats apkopo Tα1 onkoloģiskās pētniecības vēsturi. Kombinētās terapijas un pacientu iznākumus šeit neatkārtojam, jo tie nav dati par šo pētniecības materiālu. Ierobežojumi: šis ir apskats, nevis atsevišķs klīnisks pētījums.

▸ 4. pētījums: Liu 2020, klīniskie dati par COVID-19

Atsauce: Liu Y., Pan Y., Hu Z., et al. Thymosin alpha 1 reduces the mortality of severe COVID-19 by restoration of lymphocytopenia and reversion of exhausted T cells. Clin Infect Dis. 2020;71(16):2150–2157.

Ko darīja: veica retrospektīvu pētījumu. n = 76 pacienti ar smagu COVID-19, hospitalizēti divās slimnīcās Uhaņā (Ķīna) no 2019. gada decembra līdz 2020. gada martam. Salīdzināja pacientus, kas saņēma Tα1, ar neārstētajiem; vērtēja klīniskos iznākumus, aizkrūts dziedzera produkciju (TREC) un T limfocītu izsīkuma marķierus.

Ko atklāja: Pacientu iznākumus šeit neatkārtojam: tie nav dati par šo pētniecības materiālu.

Ierobežojumi: retrospektīvs dizains bez randomizācijas, mazs paraugs (n = 76).

Uzglabāšana

Liofilizāts (sausais pulveris pirms rekonstitūcijas)

• 2 gadi −20 °C temperatūrā (saldētava)
• 18 mēneši 2–8 °C temperatūrā (ledusskapis)
• Līdz 30 dienām istabas temperatūrā (≤ 25 °C), sargājot no gaismas un mitruma

Pēc rekonstitūcijas (peptīds šķīdumā ar bakteriostatisko ūdeni)

• Līdz 28 dienām 2–8 °C temperatūrā, sargājot no gaismas

Praktiski uzglabāšanas noteikumi

• Ļauj flakonam sasilt līdz istabas temperatūrai (15–20 min), pirms aizbāzni caurdur.
• Izvairies no saskares ar stipri sārmainiem šķīdumiem. Bakteriostatiskais ūdens (pašreizējās partijas sertifikātā pH 5,6) ir piemērots.
• Tumsa ir tavs sabiedrotais: uzglabā flakonu, sargājot no gaismas.
• Nekrati! Šķīdumu sajauc, uzmanīgi pagrozot flakonu.
• Šķīdumam jāpaliek dzidram un bezkrāsainam. Duļķainums var liecināt par piesārņojumu vai agregāciju; šādu šķīdumu neizmanto.

Kombinācijas un saistītās molekulas

Publicētu pētījumu par timozīna α1 kombinācijām ar citiem pētnieciskajiem peptīdiem nav; zemāk ir mehānistiski salīdzinājumi.

TB-500, cita aizkrūts dziedzera peptīdu pētījumu līnija

Tα1 un timozīns β4 abi izolēti no aizkrūts dziedzera (Goldšteina grupa), taču to mehānismi atšķiras: Tα1 pēta kā imūnmodulatoru caur T limfocītiem un Toll-like receptoriem, timozīnu β4 un TB-500 reģeneratīvajā pētniecībā caur aktīnu. Publicētu pētījumu par kombināciju nav.

Selank, atšķirīgs mehānisms

Selank pēta saistībā ar trauksmi; pēta arī tā ietekmi uz imūnsistēmu (tuftsīna analogs). Publicētu pētījumu par kombināciju ar Tα1 nav.

BPC-157, atšķirīgs mehānisms

BPC-157 pēta saistībā ar kuņģa un zarnu trakta gļotādas integritāti, Tα1 saistībā ar T limfocītu modulāciju. Publicētu pētījumu par kombināciju nav.

Epithalon, saistīta pētniecības tradīcija

Havinsona skola Sanktpēterburgā pētījusi gan aizkrūts dziedzera peptīdus, gan Epithalon. Publicētu pētījumu par kombināciju ar Tα1 nav.

MOTS-c un NAD+, saistīta pētniecības tēma

MOTS-c un NAD+ pēta saistībā ar šūnu enerģētiku, Tα1 saistībā ar imūnsenescenci. Publicētu pētījumu par kombināciju nav.

Galvenie zinātniskie dati un atsauces

Apskats par timozīnu ķīmiju un bioloģiskajām īpašībām, tostarp par to iedarbību imūnajā, endokrīnajā un centrālajā nervu sistēmā.
Goldstein AL., Badamchian M. (2004), Expert Opin Biol Ther 4(4), PubMed 15102605

Statistika no literatūras

• Thymosin Alpha-1 (Tα1), sintētisks 28 aminoskābju peptīds, sekvence Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn, molekulmasa 3 108,3 Da
• Sākotnēji izolēts no teļu aizkrūts dziedzera A. L. Goldšteina (ASV) grupā 1972.–1977. gadā
• Pētīts klīniskajos pētījumos par hronisku B/C hepatītu, sepsi un kā imūnadjuvants vakcinācijā
• Mehānisms pētījumos ar pelēm: signalizācija pa MyD88 ceļu un Toll-like receptoriem, tostarp TLR9 plazmacitoīdajās dendritiskajās šūnās, pārvirze uz Th1 atbildi; literatūrā aprakstīta arī T limfocītu nobriešanas un NK šūnu aktivitātes pastiprināšana
• Retrospektīvs pētījums par COVID-19 (Liu 2020, n = 76, Uhaņa)
• Vairāk nekā 800 ierakstu PubMed (1972–2024)

Atsauču avoti (PubMed)

1. Goldstein AL., Badamchian M. (2004). „Thymosins: chemistry and biological properties in health and disease.” Expert Opin Biol Ther 4(4):559–573. PubMed 15102605
2. Andreone P. et al. (1996). „A randomized controlled trial of thymosin-alpha1 versus interferon alfa treatment in patients with hepatitis B e antigen antibody and hepatitis B virus DNA-positive chronic hepatitis B.” Hepatology 24(4):774–777. PubMed 8855175
3. Liu Y. et al. (2020). „Thymosin alpha 1 reduces the mortality of severe coronavirus disease 2019 by restoration of lymphocytopenia and reversion of exhausted T cells.” Clin Infect Dis 71(16):2150–2157. PubMed 32442287

Regulatīvais statuss: timozīns α1 ir aktīvā viela (timalfazīns) zālēs, kas apstiprinātas vairāk nekā 30 valstīs. FDA to nav apstiprinājusi, un centralizēta EMA apstiprinājuma nav. Pieejamie dati iegūti daudzos klīniskajos pētījumos. Šeit piedāvātais produkts nav šīs zāles vai to ekvivalents: tas nav zāles, tiek pārdots tikai pētnieciskiem nolūkiem (RUO) un nav paredzēts lietošanai cilvēkiem.

Biežāk uzdotie jautājumi par timozīnu α1

Šeit atradīsi atbildes uz biežākajiem jautājumiem par timozīnu α1 pētniecības kontekstā. Pilnu tehnisko dokumentāciju skati iepriekšējās sadaļās.

Kas ir timozīns α1 un kam to izmanto pētniecībā?

Timozīns α1 (28 aminoskābju sekvence, 3 108 Da) ir dabisks peptīds, kas izolēts no aizkrūts dziedzera (Goldstein 1977). Preklīniskajos modeļos tas aprakstīts kā T limfocītu nobriešanas aktivators un TLR signalizācijas modulators ar ietekmi gan uz iedzimto, gan uz adaptīvo imunitāti. Šeit piedāvātais pētniecības produkts nav zāles.

Kādu timozīna α1 devu pētnieki izmanto dzīvnieku modeļos?

Peļu modeļos izmantotās eksperimentālās devas atšķiras atkarībā no modeļa. Tie ir dati par laboratorijas dzīvniekiem, un tos nevar attiecināt uz cilvēkiem; devas cilvēkiem nenorādām.

Kāda ir atšķirība starp timozīnu α1 un LL-37?

Timozīnu α1 preklīniskajos modeļos apraksta kā imūnās atbildes modulatoru caur dendritisko šūnu Toll-like receptoriem un T limfocītu nobriešanu, bet LL-37 ir iedzimtās imunitātes pretmikrobu peptīds ar tiešu baktericīdu aktivitāti. Tie ir atšķirīgi imūnmodulācijas mehānismi.

Vai timozīns α1 ir apstiprinātas zāles vai pētnieciska viela?

Šeit piedāvātais peptīds ir pētniecības viela, nevis zāles vai to ekvivalents; timozīna α1 regulatīvais statuss ir aprakstīts sadaļā Regulatīvais statuss. Produkts tiek pārdots tikai pētnieciskiem nolūkiem (RUO) un nav paredzēts lietošanai cilvēkiem.

Kā uzglabā timozīnu α1?

Liofilizētu timozīnu α1 uzglabā −20 °C temperatūrā, sargājot no gaismas: tas ir stabils 2 gadus; 2–8 °C temperatūrā 18 mēnešus. Pēc rekonstitūcijas šķīdums ir stabils 28 dienas 2–8 °C temperatūrā.

Kāds ir timozīna α1 eliminācijas pusperiods?

Timozīna α1 eliminācijas pusperiods serumā pēc subkutānas ievadīšanas cilvēkam ir aptuveni 2 stundas (Ancell 2001, PubMed 11381492). Tas ir farmakokinētisks parametrs, nevis lietošanas norāde.

Kur iegādāties timozīnu α1 ES zinātniskai pētniecībai?

ES timozīnu α1 zinātniskai pētniecībai piedāvā Molequa®. Uz Latviju to piegādājam ar Packeta (Venipak, Omniva) uz izsniegšanas punktu vai ar Venipak kurjeru līdz durvīm 3–5 darba dienās; tā kā tā ir piegāde ES iekšienē, nav ne muitas nodokļu, ne muitošanas formalitāšu. Produkts tiek piegādāts liofilizēts; pieejams vecāks analīzes sertifikāts, ko nav izsniegusi Analyton Labs, ar tīrību ≥ 99 %. Tas ir paredzēts tikai pētnieciskiem nolūkiem (RUO) un nav paredzēts lietošanai cilvēkiem.